基金项目：痛舒胶囊大品种培育示范项目（编号：2010BC007）通信作者：赵毅，男，云南人，正高级工程师，主要从事药品质量标准提高方面的研究，Email：yf_niu@126com摘要：目的：建立了气相色谱一电子捕获检测（ECD）法测定珠子参中有机氯农药残留方法。方法：采用Agilent DB-624毛细管柱（30 m×032 mm×18 um）；升温程序：初始温度100℃，15℃/min升至220℃，再以10℃/min升至250℃，保持17 min；进样量：10ul。结果：六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）、五氯硝基苯（PCNB）对照品均在0～400 ug/l浓度范围内呈现良好的线性关系。 结论：该方法准确可行，重复性好，可用于珠子参及其制剂的有机氯农残检测。

　　关键词：珠子参；有机氯农残；GC-ECD中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1007-2349（2013）07-0054-03有机氯农药是一类广谱的杀虫剂，曾经在中国最大规模的使用，虽然有机氯农药被禁用了多年，但六六六，滴滴涕等有机氯农药和他们的代谢产物化学性质稳定，在农作物和环境中消解缓慢，由此造成了有机氯农药在土壤中的大量残留[1]。中药材的种植期较长，尤其是多年生的根类药材，更易受有机氯农药的污染，所以有机氯农药残留在中药材的检出率相当高。而有机氯农药易在脂肪中积累，造成慢性中毒，危害人体健康，所以有必要建立各种中药材的有机氯农残检测方法。珠子参是一种中药药材，来源于五加科植物珠子参的干燥根状茎，主产于甘肃、陕西、宁夏、山西及我国西南地区。其气微，味苦、微甘，嚼之刺喉，具有补肺，养阴，活络，止血，是我国最常用的中药之一[2]。本实验选取珠子参为研究对象，建立了气相色谱一电子捕获检测（ECD）法测定珠子参中六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）和五氯硝基苯（PCNB）3种有机氯农药残留方法，为珠子参的安全使用提供了科学的质量控制依据，同时也为中药材有机氯农药残留检测方法提供借鉴。

　　1 实验部分11 仪器与试药 Agilent 6890N气相色谱仪，Ni63电子捕获检测器（ECD），自动进样器，Agilent化学工作站，SK8200HP型超声波清洗仪，TDl-40B离心机，N-1001型旋转蒸发仪，AG285型电子天平。

　　有机氯农药对照品包括六六六的4种异构体、滴滴涕的四种异构体、五氯硝基苯，其中六六六（BHC）包括：甲体六六六（α-BHC）、乙体六六六（β-BHC）、丙体六六六（γ-BHC）、丁体六六六（δ-BHC）四种异构体（质量分数大于990%）；滴滴涕（DDT）包括PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDE、PP′-DDT四种异构体（质量分数大于990%）；五氯硝基苯（PCNB，质量分数大于981%）。所有对照品质量浓度均为100μg/ml，均由农业部环境保护科研检测所提供。

　　丙酮（分析纯）；石油醚（分析纯60～90℃）；二氯甲烷（分析纯）；氯化钠和无水硫酸钠均为分析纯；硫酸（分析纯）；水为去离子水；二氯甲烷、石油醚、丙酮均经蒸馏装置重蒸馏。

　　10批珠子参药材样品采自珠子参主产地。

　　12 方法与结果121 色谱条件 Agilent DB-624弹性石英毛细管柱（30 m×032 mm×18 um），升温程序：初始温度100℃，15℃/min升至220℃，再以10℃/min升至250℃，保持17 min；进样口温度230℃，检测器温度300℃，采用不分流进样，进样量：10ul；载气为高纯氮（质量分数>99999%），总压力：22 kPa，总流量：531 mL/min，电流：1nA。理论塔板数按ɑ-BHC峰计算不低于39×105，两个相邻色谱峰的分离度大于2。

　　122 溶液的制备1221 混合对照品溶液的制备 精密量取α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDE、PP′-DDT、PCNB 对照液各05 mL，置25 mL量瓶中，加石油醚（60～90℃）至刻度，即得质量浓度为2 μg/mL的混合对照品贮备液。精密量取2 μg/mL的混合对照品储备液适量，加石油醚（60～90℃）制成5、10、40、100、200、400 μg/L的混合对照溶液。

　　1222 供试品溶液的制备 取样品于60℃干燥4 h，粉碎，过5号筛，取约2 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，加人20 mL蒸馏水浸泡过夜，精密加丙酮40 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷至室温，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6 g，精密加二氯甲烷30 mL，称定重量，超声处理15 min，放冷至室温，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速转入装有适量无水硫酸钠的100 mL具塞瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60～90℃）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀释到5ml。小心加入浓硫酸1 mL，振摇1 min，3000 r/min离心10 min。精密量取20 mL上清液，置具刻度的浓缩瓶中，连接旋转蒸发器，40℃下将溶液浓缩至适量，精密稀释至10 mL，即得供试品溶液[3]。

　　123 测定法 精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1 uL，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。

　　13 分析方法学考察131 系统适应性试验 按供试品溶液制备供试品溶液方法制备供试品溶液和缺有机氯农残的阴性供试品溶液，按照“21”项色谱条件分别进样对照品、阴性样品、供试品1ul，结果见图1。由图谱可以看出供试品溶液色谱中与对照品溶液色谱相应的位置上有相同的色谱峰出现。而阴性样品无此峰出现，表明此处理方法对有机氯农残的含量测定无干扰。 　　132 线性关系考察 分别精密量取适量混合对照品贮备液，用石油醚（60～90℃）稀释成：0、5、10、40、100、200、400 ug/L，7个质量浓度梯度的对照品溶液。各取1 uL注人气相色谱仪，依21色谱条件。分别以各组分峰面积为横坐标，质量浓度（ug/L）为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线方程和相关系数。结果表明，在上述色谱条件下，各对照品在0～400 ug/L范围内呈良好的线性关系，结果见表1。

　　133 加样回收率试验 精密称取6份供试品（样品来源云南老君山，含量分别为：总BHC-0019 mg/kg；总-DDT未检出；PCNB-0005 mg/kg）每份约2g，分别加入浓度为100 ug/L的混合对照品各10 mL，混合后挥干溶剂。按“222”项制备供试品，按照“21”项色谱条件，测定含量，计算其回收率。RSD分别为：09%、08%、11%，表明该方法的回收率较好，结果见表2。

　　134 方法的最低检测限实验 配制质量浓度为05 ug/L和10 ug/L的混合对照品溶液进样，以3倍的噪声作为方法的最低检出量，测得α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDE、PP′-DDT、PCNB的最低检测限浓度均为50ng/l。

　　135 精密度试验 精密吸取40 ug/L混合对照品溶液，按照“21”项色谱条件，重复进样6次，每次进样1 uL，测定峰面积，RSD分别为：05%、14%、05%，表明该方法的仪器精密度较好。

　　136 重复性试验 精密称取样品（样品来源云南老君山），按“222”项制备供试品，平行试验6份，按照“21”项色谱条件，进样1 uL，测定峰面积，总BHC、PCNB的RSD分别为：19%、20%，表明该方法具有良好的重复性。

　　137 稳定性试验 取同一份供试品溶液（样品来源云南老君山），按照“21”项色谱条件，于0、2、4、6、8、12 h分别进样1 uL，测定峰面积，总BHC、PCNB的RSD分别为：16%、12%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

　　138 样品测定 精密称取10批珠子参样品，按“222”项制备供试品，按照“21”项色谱条件，进样1 uL，测定含量，结果见表3。

　　方法学考察结果证明，该方法灵敏度，精密度好，对珠子参中有机氯农药残留的测定简便、结果科学可靠。

　　2 讨论21 样品前处理的选择 样品前处理采用超声提取一硫酸磺化法[4～5]，由于每批样品形状上的差异，其有机层的色素量均有差别，在用浓硫酸净化时，可适当增加振摇时间及硫酸量，直至硫酸层近无色，必要时使用漩涡混悬器。

　　22 色谱柱选择 本实验对色谱柱进行了选择，使用HP-5及HP-1，DB-624这3种色谱柱分别进行分析，发现HP-5柱对PP′-DDD，OP′-DDT的分离度只达到116，而HP-1不能完全分离9种农残对照品，而使用DB-624柱，可在较短时间内完成分析，分离度达到391。

　　2010年版《中国药典》未对珠子参中的农药残留量进行限量，参考同版药典中黄芪和甘草农药残留量限度规定[3]（总六六六和总DDT均不得过千万分之二、五氯硝基苯不得过千万分之一）、以及国外贸行业《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中关于农药残留量限度规定（总六六六和总DDT均不得过02mg/kg、五氯硝基苯不得过01mg/kg），由表2的数据可以看出，本文所涉及的珠子参产地中有机氯农药残留均不超标，且远远低于参考限度，但不同产地珠子参之间有机氯农药残留有一定的差异，如所收集的云南大理地区的样品中检测出了DDT而其他产地均未检出，云南丽江地区的样品中未检测到六六六而其他产地均有检出，为了使中药材能更好的走出国门，建议规范中药材的种植，建立 GAP 基地。本研究制定的珠子参有机氯农药的检测方法，准确可行，为更好控制珠子参质量提供了科学依据。

　　参考文献：

　　[1]成启刚，寇登民，张静，等气相色谱法测定人参、黄芪中有机氯农药残留[J].南开大学学报：自然科学版，2004，37（2）：125～128[2]段启，许冬瑾，李彩萍GC-ECD法测定白术中有机氯农药残留量[J]中草药期刊，2009，40（11）：1825～1827[3]国家药典委员会中华人民共和国药典[M].一部北京：中国医药科技出版社，2010[4]赵春杰，郝桂明，李欢欣毛细管气相色谱法测定党参中有机氯类农药残留量[J].中国药学杂志，20027：25[5]陈建民，张曙明，刘慧灵，等中药中有机氯农药残留量检测方法及限量标准研究[J].中国药学杂志，20002：40